AQP4 Ab ELISA V2

rsrltd AQP4 Ab ELISA V2

綜合使用

該RSR AQP4自身抗體(ti) ELISA版本2試劑盒僅(jin) 供專(zhuan) 業(ye) 人

員使用，用於(yu) 定量測定人血清中AQP4自身抗體(ti)

(AQP4Ab)。 視神經脊髓炎(NMO)，又稱Devic綜合

征，是一種免疫介導的神經疾病，涉及脊髓和視神

經。 它可以被認為(wei) 是一種不同於(yu) 多發性硬化(MS)的

疾病。 血清免疫球蛋白G自身抗體(ti) (NMO-IgG)已被證

明是NMO的特異性標記，水通道水通道水通道蛋白

4(AQP4)已被鑒定為(wei) NMOIgG的抗原。 當充分的臨(lin) 床

特征可能不明顯，早期幹預可能預防或延遲殘疾

時，AQP4Ab的測量在區分NMO和MS方麵具有相當

大的價(jia) 值。

參考資料

V.A.Lennon等人。

視神經脊髓炎的血清自身抗體(ti) 標誌物：與(yu) 多發

性硬化症的區別。

2004364（9451）：2106-2112

V.A.Lennon等人。

視脊多發性硬化症Ig G標記物與(yu) 水通道結合。

2005年實驗醫學雜誌202：473-477

B.G.Weinshenker等人。

視神經髓炎IgG預測縱向廣泛的橫向脊髓炎後複

發。

2006年神經病學年鑒59：566-569

N.Isobe等人。

視神經脊髓炎抗aquaporin-4抗體(ti) 的定量分析及

亞(ya) 類分析。

多發性硬化症雜誌201218：1541-155

S.Jarius等人。

ELIS A法檢測人水通道蛋白-4抗體(ti) ：敏感性、

特異性及與(yu) 免疫組織化學的直接比較。

神經科學雜誌2012320

32-37

支出

下列適用：

歐洲EP1700120B1，

美國7,101，679

美元 B2， 美國 7,947,254

B2 和 美國

中國ZL200880040851.3

日本4538464。

亞(ya) 洲原則

在RSR的AQP4AbELISA版本2試劑盒中，患者血清中

的AQP4Ab允許校準器和對照組與(yu) 塗在ELISA板井和液

相生物素化AQP4(AQP4-生物素)上的AQP4相互作用。

室溫孵育2小時後隨搖，井內(nei) 容物丟(diu) 棄.. 與(yu) 塗在井上

的AQP4結合的AQP4Ab也將通過樣品中AQP4Ab的能

力 與(yu) AQP4-Biotin 相 互 作 用 ， 使 AQP4-Biotin 通 過

AQP4Ab橋與(yu) 井結合。 然後，在第二個(ge) 孵育步驟中確

定AQP4-Biotin結合的數量，該步驟涉及添加鏈黴親(qin)

和素過氧化物酶(SA-POD)，該酶與(yu) 生物素特異性結

合。 過量的、未結合的鏈黴親(qin) 和素過氧化物酶被衝(chong)

走，加入過氧化物酶底物3，3‘，5，5’-四乙基聯苯

胺(TMB)，形成藍色。 這種反應是通過加入一個(ge) 停

止溶液來停止的，導致井內(nei) 物變黃。 然後用ELISA平

板閱讀器讀取黃色反應混合物在450nm和405n m處

的吸光度。 較高的吸光度表明測試樣品中存在AQP4

自身抗體(ti) 。 在405n m處讀取允許定量高吸收。 建議

在450n m處測量低於(yu) 10u/mL的值.. 如果隻能在一個(ge)

波長405n m處讀取，則可以使用。 測量間隔為(wei) 3.0-

80u/mL(任意RSR單位)。

檔案 和發展 籌備工作

所設委員會(hui) SERUM樣品

待分析的血清應在分離或儲(chu) 存後不久測定，宜是

在-20或以下的別名中測定

奧

C. 100L足以

作一次化驗（重複50次） 確定)。 應避免反複凍

融或儲(chu) 存溫度升高.. 不要使用脂血

症或溶血的樣本。 研究表明，EDTA、檸檬酸和肝素

血漿樣品中加入AQP4A B陽性血清的信號與(yu) 來自同一

供體(ti) 的加標血清相比略有變化。 特別是OD450 加

標EDTA、檸檬酸和肝素等離子體(ti) 的值為(wei) 加標血清的

79%-128%(血清濃度為(wei) 2.6u/ml-30u/ml)或87%-130%。

當需要時，在室溫下解凍測試血清，並輕輕混合，

以確保均勻性。 測定前離心血

清（宜在10，15，000轉/分的微格中離心5分鍾）

以去除顆粒物質。 如果血清是多雲(yun) 的或含有微粒，

請不要遺漏這一離心步驟。

綜合

文號 意義(yi)

歐共體(ti) 遵守情況聲明

IVD 體(ti) 外診斷裝置1

聖斯特

2019

年5月

第4頁2 訂正5

參考資

料

目錄編號

旅館 批號

查閱指引

由

足以

終止日期

商店

負控製

積極控製

需要但未提供的材料

能夠分發25個(ge)  L，50 L和100 L.

測量各種體(ti) 積的方法，以重建或稀釋所提供的試

劑。

純淨水。

ELISA平板閱讀器適用於(yu) 96個(ge) 井格式，可在450nm

和405n m處測量。

ELISA平板搖床，可搖動500次/分鍾（不是軌道

搖床）。

ELIS A板蓋。

擬訂所提交的

將未開封的試劑盒和所有試劑盒組件存放在2-8

奧

C.

ASSA程序

允許所有試劑在室溫下（2025年）

奧

使用前至少

C)30分鍾。 不要重建AQP4-生物素，直到下麵的步驟

2。 對於(yu) 步驟2、5、8和9，建議使用Eppendorf型重

複吸管。

1. 管道50 將病人血清、校準器(B1-5)和

對照器(C1-2和D)放入各自的井中。 留

下一個(ge)

空得很空。

2. 重組 AQP4-生物毒素 和

移液管25 入每口井（空

白除外）..

3. 蓋上框架，在室溫下用ELIS A法搖動2小

時

平板搖床（每分鍾500搖）。

4. 使用ELIS A板墊圈吸氣，用稀釋洗滌液

(J)洗三次井。 如果沒有平板墊圈，用

適當的貯器迅速地將井框倒置，然後用

手洗三次，然後輕輕地用幹淨的幹吸收

劑輕輕地敲擊倒置的井

表麵去除多餘(yu) 的洗滌。

E.

AQP4-

Biotin3小瓶

凍幹機

在使用前，立即用重建緩衝(chong) 器重建

AQP4-生物毒素(F)，

每瓶1.5毫升。 不止一瓶

要使用，將瓶子的內(nei) 容物集中起

來，輕輕混合。

F

AQP4-生物素重建緩衝(chong) 劑10mL

準備使用

G.

鏈黴親(qin) 和素過氧化物酶(SA-POD)

0.8米L

用 稀 釋 劑 在 20 中 稀 釋 1 ， 以 稀 釋

SAPOD(H) 。 例 如 ， 0.5 米 L(G)+9.5 米

L(H)。 2-8多儲(chu) 存16周

奧

C.C

稀釋後。

H.

SA-POD15m L稀釋

劑

準備使用

我

是

過氧化物酶(TMB)15米L

準備使用

J

濃縮洗滌液120毫升

集中

使用前用純水稀釋1/10..

儲(chu) 存於(yu) 2-8

奧

直到工具包失效日期。

KK

停止使用14

米升

準備使用

A.

AQP4覆蓋井

一個(ge) 框架內(nei) 12條8口井（總共96口）的破

碎條，密封在箔袋中。 允許箔袋在室溫

下站立（20-25）

奧

C)30分鍾

在打開之前。

確保井牢固地安裝在所提供的框架中。

打開後，將任何未使用的井返回原箔袋，

並用膠帶密封。 然後將鋁箔袋放入裝有

幹燥劑的自封塑料袋中，存放於(yu) 2-8

奧

C

多

4個(ge) 月。

B1-

5

計算器

1.5、5、20、40、80微克/升

(任意RSR單位)

準備使用

C1-

2

積極控製一和二

（見濃度範圍標簽）

準備使用

D.D.

負控製

0.7米

準備使用1

聖斯特

2019

年5月

第4頁3 訂正5

在405n m處的吸光度讀數可以通過乘以適當的因

子(在RSR使用的設備的情況下為(wei) 3.4)來轉換為(wei)

450nm的吸光度..

關(guan) 閉警報

陰性 <3.0u/m L

積極正麵  3.0u/m L

結果分析

通過在x軸（對數標度）上繪製校準器濃度與(yu) y軸

（線性標度）上校準器的吸光度之間的關(guan) 係，可

以建立校準曲線。 然後，患者血清中的AQP4Ab

濃度可以讀出校準曲線[在RSR上繪製為(wei) 樣條log/lin

曲線（平滑因子=0）]。 可以使用其他數據還原係

統.. 陰性對照可賦值0.15u/ml，協助計算機處理分

析結果。 AQP4Ab濃度高於(yu) 80u/mL的樣品可以稀

釋(例如。

AQP4A b陰性血清中10x和/或100x)。 有些血清不

會(hui) 以線性的方式稀釋。

實際結果（僅(jin) 示例；不用於(yu) 計算實際結果）

這一切斷已在RSR驗證。 然而，每個(ge) 實驗室應建立

自己的正常和病理參考範圍的AQP4Ab水平。 此

外，建議每個(ge) 實驗室在分析中包括自己的對照樣品

麵板。

化學評價(jia)

(以下資料來自450nm數據)

臨(lin) 床特異性

來自358名個(ge) 人健康獻血者的血清在AQP4AbELISA

版本2試劑盒中進行了測試。 356（99%）血清為(wei)

AQP4Ab陰性。

臨(lin) 床敏感性

在62例NMO或NMO頻譜紊亂(luan) (NMOS D)患者中，48

例（77%）為(wei) AQP4Ab陽性。

下限檢測限

陰性對照測定20次，計算均值和標準差。 在2個(ge)

標準差下檢出限為(wei)

0.17微克/升

內(nei) 測精度

樣本 平均單位/單位L

（單位=25）

簡曆

（%）

1 3.9 7.7

2 7.0 8.6

3 28 3.2

4 58 3.1

Inter Assess精準度

樣本 平均單位/單位L

（單位=20）

簡曆

（%）

A. 5.0 15.6

B.B. 13.3 10.5

C.C 35 7.9

D.D. 59 7.5

4

5

0

n

m

處

的

吸

光

度

5. 管道100 稀釋後的SA-POD(G)升

每口井（空白除外）。

6. 蓋上盤子，孵育20分鍾

室溫下在ELISA平板搖床上分鍾（每分鍾

500次搖）。

7. 重複洗滌步驟4。 如果正在進行手動清

洗，則使用純水進行後清洗步驟（以

去除任何泡沫）。

在把井敲幹之前。

8. 管道100 將TMB(I)L放入每口井中（包括

空白），室溫下在黑暗中孵育20分鍾。

沒有顫抖。

9. 管道100 將L停止溶液(K)注入每口井

（包括空白），並在平板搖床上搖動約5

秒。 確保底物孵育

每口井都是一樣的。

10. 在10分鍾內(nei) ，用ELIS A板閱讀器讀取每口

井在450nm和405n m處的吸光度，並在

100口井上空白 TMB(I)及

100 隻有L停止溶液(K)。

A450

nm波

長

Conc.

單

位：

A405

nm

波長

Conc.

單

位：

陰性對照(D) 0.021 0.006

B1 0.085 1.5 0.024 1.5

B2 0.354 5 0.108 5

B3 1.577 20 0.468 20

B4 3.802 40 1.118 40

B5 6.588 80 1.938 80

積極控製(C I) 0.755 12.1 0.224 12.0

陽性對照(CII) 2.506 28 0.745 281

聖斯特

2019

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第4頁4 訂正5

臨(lin) 床準確性

除視神經脊髓炎頻譜紊亂(luan) (NMOS D)以外的自身免

疫性疾病患者的205份血清分析表明，自身抗體(ti)

對TSH受體(ti) (n=110)、穀氨酸脫羧酶(n=26)、21羥化

酶(n=12)、乙酰膽堿受體(ti) (n=10)、甲狀腺過氧化物

酶(n=15)、甲狀腺球蛋白(n=10)、IA-2(n、7)或類

風濕因子(n=15)的幹擾。

幹涉

當樣品加入以下材料時，沒有觀察到幹擾；膽紅素

在20mg/dL或脂內(nei) 高達3000mg/dL。 血紅蛋白在

500mg/dL時有幹擾。

安全考慮

鏈黴親(qin) 和素過氧化物酶(SA-POD)信號

詞：警告

危險說明

H317：可能會(hui) 引起皮膚過敏反應

P280：戴上防護手套/防護服/眼睛保護/麵部保

護

P302+P352：如果在皮膚上：用大量肥皂和

水清洗

P333+P313：如果發生皮膚刺激或皮疹：請就

醫/注意

P362+P364：脫去汙染的衣著，洗淨後再用

過氧化物酶(TMB)信號

詞：危險危險聲明

H360D：可能會(hui) 傷(shang) 害未出生的孩子

亞(ya) 洲計劃

防範說明

P280：戴上防護手套/防護服/眼睛保護/麵部保護

P308+P313：如果暴露或有關(guan) ：獲得醫療建議/

注意

該工具包僅(jin) 供專(zhuan) 業(ye) 人員使用。 仔細遵照指示。 觀察

標簽上規定的過期日期和重組試劑的穩定性。

有關(guan) 更詳細的安全信息，請參閱安全數據表。 避免

所有可能導致攝入的行為(wei) 。 避免接觸皮膚和衣物..

穿著防護服。 用於(yu) 製備試劑盒的人類來源材料已進

行了測試，發現HIV1和2、HCV抗體(ti) 和HBsAg均無反

應，但應毫無反應地處理為(wei) 具有潛在傳(chuan) 染性。 如果

有汙染，在離開實驗室之前*洗手。 對所有潛在

汙染的廢物進行消毒，包括處置前的測試樣本。 用

於(yu) 製備試劑盒的動物來源材料已從(cong) 經認證為(wei) 健康動

物中獲得，但這些材料應作為(wei) 潛在的傳(chuan) 染性處理。

部分成分含有少量疊氮鈉作為(wei) 防腐劑.. 與(yu) 所有試劑

盒成分，避免攝入，吸入，注射或接觸皮膚，眼睛

或衣服.. 避免在排水係統中形成重金屬疊氮化物，

方法是用大量的水衝(chong) 走任何試劑盒組件。

允許所有試劑和樣品達到室溫（20-25）

奧

使用前C)

吸管： 50 L校準器、對照組和病人血清

吸管： 25 LAQP4-Biotin（重組)進入每口井(空白除外）