genelink優質寡核苷酸合成-韦德网站官方入口
歡迎進入韦德网站官方入口!
技術文章
首頁 > 技術文章 > genelink優質寡核苷酸合成

genelink優質寡核苷酸合成

 更新時間:2020-06-10 點擊量:1378

 

genelink優質寡核苷酸合成

 

Unmodified Oligonucleotides (price per base)*
Product50 nmol scale200 nmol scale1 umol scale2 umol scale10 umol scale15 umol scale
Catalog No.26-6400-0526-6400-0226-6400-0126-6400-0326-6400-1026-6400-15
Unmodified Oligonucleotides$0.50$0.90$1.95$2.95$19.50$27.65
Maximum Length of Synthesis80 mer120 mer200 mer250 mer250 mer250 mer

 

凝膠純化

如果應用將用於(yu) PCR或測序,則所有短於(yu) 40 mer的Gene Link寡核苷酸都不需要進一步純化。以99.5%的偶聯效率合成的20 mer寡核苷酸將包含〜90%的全長20 mer和〜10%的截短序列的混合物。隨著寡核苷酸長度的增加,即使在99.5%的偶聯效率下,全長寡核苷酸的產(chan) 量也會(hui) 降低。60 mer原油產(chan) 品將包含〜75%的全長寡核苷酸,同樣,100 mer將包含〜60%。強烈建議對50 mer以上的寡核苷酸進行純化。

 

純化(每個寡核苷酸的價格)
產品50 nmol規模200 nmol規模1 umol量表2摩爾規模10 umol量表15 umol量表
貨號(PAGE)26-6400-7726-6400-7726-6400-5526-6400-8826-6400-4426-6400-99
凝膠純化(PAGE)75.0075.00150.00280.001500.001800.00
貨號(RPC)26-6400-1126-6400-1126-6400-2226-6400-2326-6400-3326-6400-34
反相純化(RPC)30.0030.0090.00170.00750.00900.00

 

寡核苷酸的合成規模和未修飾的寡核苷酸的典型產量*
 原油脫鹽RPC純化**凝膠純化
20 mer oligo 
典型產量
30 mer oligo 
典型產量
50 mer oligo 
典型產量

規模

260夥(huo)

納摩爾

毫克

260夥(huo)

納摩爾

毫克

260夥(huo)

納摩爾

毫克

50納摩爾

8-1030+0.2-0.34-512+0.1-0.16NR * [1-2]NR * [2-4]NR * [0.03-0.06]

200納摩爾

20-2580+0.6-0.88-1224+0.26-0.44-68+0.13-0.2

1 ü摩爾

100-120400+3-440-5090+1.3-1.620-2540+0.6-0.8

2 û摩爾

200-240800+6-880-100180+2.5-3.140-5080+1.2-1.5

10 ù摩爾

〜1000〜4000〜30〜400〜900〜10〜200〜400〜60

15 ù摩爾

〜1500〜6000〜45〜600〜1350〜15〜300〜600〜90

純度和產(chan) 率

純度大於(yu) 80%

 

取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸的序列和結構。有關(guan) 寡核苷酸長度相關(guan) 的純度和產(chan) 率,請參見偶聯效率表。

PCR和測序應用無需進一步純化。

凝膠純化建議用於(yu) 50 mer以上的寡核苷酸以及涉及克隆和誘變的所有應用。

** RPC是使用藥筒進行的反相純化;HPLC的替代品。

純度85%至95%

 

取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸序列和結構

GC含量高的序列的收率和純度會(hui) 更低

不建議用於(yu) 35 mer以上的寡核苷酸。

** RPC是使用藥筒進行的反相純化;HPLC的替代品。

純度98%至〜100%

 

取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸序列和結構

隨著寡核苷酸長度的增加,產(chan) 量將逐漸降低。回文,發夾和高GC含量的寡核苷酸以及包含3個(ge) 或更多G鏈的寡核苷酸會(hui) 誘導強烈的二級結構和堿基堆積,從(cong) 而降低純度和產(chan) 量。

*不推薦NR

*一個(ge) 。表中列出的典型產(chan) 量是未修飾的隨機序列寡核苷酸。使用高GC含量的寡核苷酸和形成強二級結構的寡核苷酸可觀察到產(chan) 量降低。

b。改性寡核苷酸預計產(chan) 量會(hui) 降低。減少百分比隨修改類型和站點數量而變化。每個(ge) 修飾位點的典型減少量為(wei) 10%-20%。

C。對於(yu) 等摩爾的堿基組成,計算出的寡核苷酸的產(chan) 量為(wei) 33µg / A260。單基或均聚物的長拉伸將具有可變的產(chan) 率。均聚物20 mer的示例:dA(20)=〜25ug / A260單位;dC(20)=〜40ug / A260單位; dG(20)=〜32ug / A260單位和dT(20)=〜37 ug / A260單位

 


 

合成後修飾的共軛/轉化(NHS,硫醇,馬來酰亞(ya) 胺等)的合成和產(chan) 率規模

Most oligo modifications are directly coupled using optimized automated synthesis protocols that are suited for specific modifications. The final yield varies and are usually around 80% of the yield of the unmodified oligos. Multiple modifications and sites in the same oligo may lead to further reduction in final yield. 
Certain modification (e.g Alexa fluorescent dyes, digoxigenin, etc) are not available for direct autoamted coupling chemsitry and have to be conjugated using post synthesis methods involving amino group to NHS (N - hydroxysuccinimide) ester, thiols to maleimide and other post synthesis conversions. 
這些合成後的共軛反應動力學可產(chan) 生約60-85%的終產(chan) 物,建議使用聚丙烯酰胺凝膠純化。這些合成後綴合的收率指南在下麵列出。

合成的寡核苷酸規模和合成後修飾的典型產率* 
(NHS,馬來酰亞胺,堿轉化等)
 RPC純化**凝膠純化
20-40 mer oligo 
典型產量
20-40 mer oligo 
典型產量

規模

260夥(huo)

納摩爾

毫克

260夥(huo)

納摩爾

毫克

50納摩爾

〜2〜4〜0.06〜1〜2〜0.03

200納摩爾

〜4〜8〜0.12〜2.5〜5〜0.07

1 ü摩爾

〜12〜24〜0.36〜8〜16〜0.24

2 û摩爾

〜20〜40〜0.6〜15〜30〜0.45

10 ù摩爾

〜100〜200〜3.0〜75〜150〜2.25

15 ù摩爾

〜150〜300〜4.5〜112〜225〜3.36

純度和產(chan) 率

純度60%至80%

 

取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸序列和結構

GC含量高的序列的收率和純度會(hui) 更低

不建議用於(yu) 35 mer以上的寡核苷酸。

** RPC是使用藥筒進行的反相純化;HPLC的替代品。

純度85%至〜98%

 

取決(jue) 於(yu) 寡核苷酸序列和結構

隨著寡核苷酸長度的增加,產(chan) 量將逐漸降低。回文,發夾和高GC含量的寡核苷酸以及包含3個(ge) 或更多G鏈的寡核苷酸會(hui) 誘導強烈的二級結構和堿基堆積,從(cong) 而降低純度和產(chan) 量。

*不推薦NR

*一個(ge) 。使用高GC含量的寡核苷酸和形成強二級結構的寡核苷酸可觀察到產(chan) 量降低。

b。改性寡核苷酸預計產(chan) 量會(hui) 降低。減少百分比隨修改類型和站點數量而變化。每個(ge) 修飾位點的典型減少量為(wei) 10%-20%。

C。對於(yu) 等摩爾的堿基組成,計算出的寡核苷酸的產(chan) 量為(wei) 33µg / A260。單基或均聚物的長拉伸將具有可變的產(chan) 率。均聚物20 mer的示例:dA(20)=〜25ug / A260單位;dC(20)=〜40ug / A260單位; dG(20)=〜32ug / A260單位和dT(20)=〜37 ug / A260單位

 

 

 

 

51La