lumafluor 78R180說明書

78R180 Red Retrobeads™ IX (100 µl)

產(chan) 品概述

RetroBeads Gamma Lumafuor是lumafuor公司第一款反向示蹤產(chan) 品，也是唯1被證明有效的產(chan) 品（該產(chan) 品的有效性已被從(cong) 無脊椎動物到無脊椎動物的數百篇研究論文證實）。

類別：產(chan) 品內(nei) 容

Cas  ：78R180

大小：100微升

品牌：lumafluor 

示蹤產(chan) 物體(ti) 內(nei) 注射濃度高，不易擴散，信號強，對活細胞或活體(ti) 無毒，存活時間一年以上。它與(yu) 以下大多數示蹤劑、原位雜交檢測技術和免疫組織化學技術兼容。

部分產(chan) 品信息如下：

紅色逆轉珠（100μl）

綠色逆向珠IX （100 μl）

紅色逆轉錄珠伽瑪IX（100μl）

本手冊(ce) 總結了使用熒光乳膠微球（珠子）作為(wei) 神經元逆行示蹤劑的大多數程序。有關(guan) 綠色珠子的信息，請參閱本手冊(ce) 的末尾。有關(guan) 更多詳細信息，請參閱Katz，L.C的以下論文

1.Katz，L.C.，Burkhalter，A.和Dreyer，W.D.熒光乳微球逆行神經元Markerforinvivoandinvitros tudiesofvisual cortex.自然310 ：498-500（1984）

2.卡茨，L.C.和Iarovici，D.M.綠色熒光光層：新的逆行示蹤劑。神經科學34 ：511-520（1990）

魯馬福爾高效複古珠操作說明

1、 包裝和稀釋：

Lumafuor的珠子被包裝在一個(ge) 密封的小瓶中，濃縮的珠子懸浮在蒸餾水中。如果使用紅色磁珠作為(wei) 神經通路的反向示蹤，則推薦使用稀釋方法：1：4稀釋可用於(yu) 大鼠視覺皮層，而不會(hui) 降低磁珠熒光標記的強度和質量。但是，對於(yu) 第一個(ge) 實驗，我們(men) 不建議使用稀釋的磁珠，而是使用原始溶液進行注射示蹤。除蒸餾水外，NaCl和KCl等常規鹽溶液也可用作稀釋劑。如果使用綠色珠子，強烈建議使用不稀釋的儲(chu) 備溶液。

2、 儲(chu) 存：

為(wei) 避免蒸發，珠子溶液應在冰箱中儲(chu) 存4度。不要凍結它！冷凍豆子將無用且無法使用。幹燥的珠子也不能使用（不能重新懸浮），產(chan) 品沒有明顯的使用壽命。如果需要存儲(chu) ，它可以存儲(chu) 數年。

3、 注射：

珠子最好使用壓力注射，如1ml漢密爾頓微注射器或氣動注射係統。如果需要小麵積顯微注射（30-50nl），可以使用末端直徑為(wei) 30-50um的玻璃電極進行注射，而直徑較大的玻璃電極可用於(yu) 常規反向示蹤（注射體(ti) 積0.1-0.3ul）。然而，即使在較高劑量下，磁珠也不會(hui) 從(cong) 注射部位顯著擴散（通常小於(yu) 1mm）。因此，為(wei) 了盡可能完quan地標記投射到更大細胞核的神經元，需要多點注射。雖然磁珠帶負電，但不建議使用離子滲透法追蹤磁珠。

4、 生存時間：

在大多數恒溫脊椎動物係統中，檢測磁珠的最短有效時間為(wei) 24小時。在48小時內(nei) ，標記強度隨進樣時間增加，48小時後熒光強度保持不變。在冷血動物中，檢測珠子的推薦時間為(wei) 1周。目前，尚未檢測到最長的珠子可檢測周期。然而，磁珠的熒光強度和質量可以在體(ti) 內(nei) 保持至少14個(ge) 月不變，並且細胞可以被永jiu標記。在動物或神經元中沒有發現珠子的毒性作用。

五、固定與(yu) 治療：

標準的固定方法是：洗滌或灌注0.1mpbs並固定在4%多聚甲醛（0.1mpbs製劑，pH7.4）中。用戊二醛固定會(hui) 產(chan) 生大量的組織自發熒光，這會(hui) 阻礙用珠子標記的神經元。而且，在戊二醛固定組織中不會(hui) 完quan觀察到綠色珠子，因此應盡可能避免。如果使用冷凍部分，則應用PBS衝(chong) 洗切片並用明膠塗層載玻片幹燥。風幹後，載玻片應用二甲苯透明1分鍾，然後用氟鑲或氪密封。氟卡特可以從(cong) atomrgic chemetals Corp.（紐約法明代爾）購買(mai) ;克裏斯塔隆可以從(cong) 以下位置購買(mai)

Harleco（EM Industries，新澤西州吉布斯敦）。切片隻能短時間暴露在乙醇或二甲苯中，但長期暴露（超過 5 分鍾）會(hui) 損壞珠子。磁珠對甘油非常敏感，在甘油環境中會(hui) 很快提取熒光。因此，不應使用甘油密封劑。如果不可避免，可以使用水楊酸甲酯代替甘油作為(wei) 密封劑。如果切片儲(chu) 存在黑暗環境中，則用熒光珠標記的細胞一年內(nei) 無法提取（但切片的熒光背景會(hui) 增加）。到目前為(wei) 止，還沒有珠子標記組織塗有塑料材料的記錄。

觀察：

紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用所有與(yu) 羅丹明匹配的熒光濾光片。尼康公司的一些老式羅丹明濾光片由於(yu) 背景較高，可能無法觀察到熒光珠。一般來說，蔡司和萊茨的標準羅丹明過濾器可以獲得更好的觀察效果。大多數綠色熒光濾光片都能很好地觀察綠豆的熒光結果。將濾光片設置為(wei) 熒光黃色可以獲得強烈的明亮熒光，但也帶來了很高的背景幹擾。結果表明，比窄帶濾光片更寬波段的熒光濾光片可以獲得更強的熒光信號。經過長時間的觀察和拍照，珠子的熒光沒有