ComplementTech C5說明書

ComplementTech C5說明書(shu)

名稱： C5蛋白

編號： A120

規格： 250 µg/vial

濃度： 1.0 mg/mL (實際濃度見分析證書(shu) )

類型 冷凍液體(ti)

活動： >值為(wei) 80%，與(yu) 正常人血清標準相比。

純度： >95%由SDS-PAGE

緩衝(chong) 區： 10 mM磷酸鈉，145 mM氯化鈉，pH 7.2

消缺係數。 A280 nm在1.0 mg/mL時的=為(wei) 1.03

分子量： 190000Da (2鏈)

防腐劑： 無，0.22µm過濾

存儲(chu) ： - 7 0oC或以下。避免凍融。

根源 正常的人類血清 (經認證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體(ti) 檢測均為(wei) 陰性) 。

預防措施 在處理人類血液製品時要采取常規的預防措施。

一般說明

天然人類C5是一種天然糖基化 (1.6%) 多肽，包含兩(liang) 個(ge) 二硫鍵鏈。C5對於(yu) 膜攻 擊複合物 (MAC) 的形成是必不ke少的，並可被補體(ti) 激活的所有三種途徑激活。補體(ti) 激活的每個(ge) 途徑都產(chan) 生蛋白水解酶複合物 (C3/C5轉化酶) ，它們(men) 與(yu) 目標表麵結合   (Ross，G。D. (1986)).這些酶在C5的較大的阿爾法鏈中切割一個(ge) 肽鍵，釋放高效的 過敏性毒素C5a (74個(ge) 氨基酸) 並激活C5b。這是C5b-9複合物組裝過程中唯yi的蛋白 水解步驟。C5b是不穩定的，但它仍然與(yu) 激活複合物結合短暫的時間 (~2分鍾) ，在 此期間，它要麽(me) 與(yu) 周圍液體(ti) 中的一個(ge) C6結合形成C5b，6，要麽(me) 衰變並聚集，不再能夠 形成MAC。C5b，6複合物也可能繼續與(yu) C3/C5轉化酶結合，其中單個(ge) C7的結合暴露了一 個(ge) 膜結合區域，而C5b，6,7可以部分插入靶細胞的膽脂層。到目前為(wei) 止，該複合物可 能會(hui) 從(cong) 目標細胞擴散出去，進入附近細胞的細胞膜。這被稱為(wei) 旁觀者裂解或“反應性 裂解" ，可以是一個(ge) 重要的病理來源。每個(ge) C5b-7複合物都可以結合一個(ge) C8蛋白分子 ，從(cong) 而使該複合物更牢固地插入到細胞膜中。這個(ge) 複合物與(yu) C9結合，每個(ge) 結合的C9可 以結合另一個(ge) C9，起始形成一個(ge) 包含多達18個(ge) C9分子的環狀結構(Podack，E。       R. (1984)).具有一個(ge) 或多個(ge) C9的C5b-9複合物被稱為(wei) 補體(ti) 的膜攻擊複合物 (MAC) 。  並不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9環，平均每個(ge) C5b-8配合物隻有3個(ge) C9。C9的 完整的蛋白環形成了電子顯微鏡上看到的孔，它們(men) 導致代謝物和小蛋白質泄漏出細胞 ，以及水進入細胞。如果將足夠數量的水插入細胞膜，那麽(me) 由於(yu) 滲透壓，流入細胞的 水就會(hui) 使細胞膜破裂，使目標細胞 (或一個(ge) 旁觀者細胞) 的全部內(nei) 容物被釋放出來。 任何一種過程都可能導致細胞死亡。最初人們(men) 認為(wei) 每個(ge) 細胞隻需要一個(ge) C5b-9複合物( 被稱為(wei) 裂解的“一打擊理論"(隆美爾F。A.和梅耶爾，M.M. (1973) )，但這可能是不正確的。例如，一個(ge) 紅細胞需要大約850個(ge) C5b-9 複合物，通過C7分子的數量來衡量，才能發生裂解(Bauer，J。以及其他人     (1979)).受CD59保護的抗MAC的宿主細胞需要足夠數量的C5b-9來捆綁所有的CD59 ，然後再捆綁大約850個(ge) C5b-9。有核細胞的裂解需要更多的C5b-9複合物，因為(wei) 它們(men) 的大小和在這些細胞中存在多種防禦機製。

物理特性和結構

分子量：  190,000 Da，由兩(liang) 個(ge) 二硫鍵連接鏈組成。阿爾法鏈是 115,000 Da ， 貝塔鏈是75,000 Da 。阿爾法鏈和阿爾法鏈是通過一個(ge) 二硫鍵連接起來的。C5 的 pI為(wei) 4.7到5.5。

C3/C5轉化酶切割C5，從(cong) alpha鏈的n端釋放C5a ( 一個(ge) 74個(ge) 氨基酸片段，8268 Da去糖基化，10400+1000糖基化) 。C5b片段 (181,000 Da) 與(yu) C6結合，啟動膜攻擊 複合物的自發組裝。

CAS編號：80295-53-0

 測定

C5zui簡單的檢測方法是使用C5耗盡的人血清，並測量EA (經典途徑) 或Er (替 代途徑) 的裂解，作為(wei) 添加的測試樣品或標準純化C5濃度的函數。每個(ge) du特的應用程 序都可能需要確定適當的條件。然而，一個(ge) 典型的檢測方法包括在濕冰上混合25µL  C5-Dpl，含c5的樣品用GVB++稀釋到1到10 ng C5，以及足夠的GVB++使體(ti) 積達到300µL 。EA (3 X 107最後加入200µL)。純化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作為(wei) C5的來源。 將反應混合物在37個(ge) 條件下孵育30 mino加入C和1 mL的冷GVBE。然後混合反應並離心 ，旋轉未裂解的細胞。然後在415 nm處分析上清液中釋放的血紅蛋白，並與(yu) 不含C5的 空白細胞 (背景裂解對照) 和用275µL水代替GVB++和25µL C5-Dpl (100%裂解對照)  進行比較。

許多其他的檢測方法已經被描述為(wei) 使用EA預加載C1 (EAC1細胞) 或預加載經典 途徑C5轉化酶 (EAC1423細胞) 。然而，所有這些檢測方法都需要使用多種純化的補 體(ti) 成分或更難以製備的試劑(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2 000)

參考文獻

Bauer, J., Podack, E.R. and Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave and spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.

Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.